恶人谷

beads在用之前为什么要用elution buffer洗啊

我和公司联系了一下，还是决定买新的beads了

4ul就好吗，我的protocol建议20ul，我取10来跑胶，正跑着呢，一会儿染一下看看

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另，再看看你上次的发言，是说“我做实验遇到的问题是在西点的时候，蛋白G或蛋白A会出来一条非特异的带，和我的目的蛋白非常接近，有时候会覆盖目的带。” 而这次的问题就变成很多很多条带了。到底哪个作准？

而且，上次大家给你出主意，还问了不少问题，你的回答是？又问新的了。问答问答，得有来有往。我的回答到此。[/quote

我上的不够及时，没能看到之前的那个帖子，而且我在国内，有时差会的不够及时，还请谅解。另外，这个实验不是从我这里开始的，师姐开始做的，那时候我还不在实验室，上次说的一条非特异的带是师姐告诉我的，让我先想想

我的loading buffer是有SDS的，用的4X，我煮了两个，一个是95度5分钟，另一个是煮沸3分钟，都是先加buffer煮的，block是用的百分之五的脱脂奶，封闭一小时，一抗是买来的，兔的多克隆抗体

大家好，我在论坛中看到了有关免疫共沉淀的内容，我最近也想做，但是我买的protein A agorose引起的非特很严重，我今天把protein A agorose取10微升加loading buffer煮沸5分钟，然后做western，结果出来的条带一条挨一条，几乎全是条带了。我就纳闷儿了，不就是protein A 吗，怎么会有那么多的条带，是我处理的方法不对吗？我该怎么做

大家好，我是刚入谷的后背晚生，也想请教几个问题。Preclear的作用是啥？我做实验遇到的问题是在西点的时候，蛋白G或蛋白A会出来一条非特异的带，和我的目的蛋白非常接近，有时候会覆盖目的带。大家有没有高招啊